Ansatz |
Plasmid |
Plasmidpräp. |
Plasmidmenge
|
Verdünnung |
Kolonien ges. |
Kolonien/ |
|||
1-1 |
pAmp |
alk. Lyse |
50 |
14,3 |
unverdünnt |
~2160 |
2,2 x 105 |
||
1-2 |
pAmp |
alk. Lyse |
50 |
14,3 |
1 zu 10 |
270 |
2,8 x 105 |
||
2-1 |
pAmp |
alk. Lyse |
50 |
5,6 |
unverdünnt |
~1840 |
1,9 x 105 |
||
2-2 |
pAmp |
alk. Lyse |
50 |
5,6 |
1 zu 10 |
230 |
2,3 x 105 |
||
3-1 |
pAmp |
alk. Lyse |
10 |
1,1 |
unverdünnt |
234 |
1,2 x 105 |
||
3-2 |
pAmp |
alk. Lyse |
10 |
1,1 |
1 zu 10 |
26 |
1,3 x 105 |
||
4-1 |
pAmp |
Kochlyse |
50 |
14,3 |
unverdünnt |
~610 |
6,3 x 104 |
||
4-2 |
pAmp |
Kochlyse |
50 |
14,3 |
1 zu 10 |
61 |
6,3 x 104 |
Ansatz |
Plasmid |
Plasmidpräp. |
Plasmidmenge
|
Verdünnung |
Kolonien ges. |
Kolonien/ |
|||
1-1 |
pBR 322 |
250 |
10 |
unverdünnt |
1100 |
5,3 x 104 |
|||
1-2 |
pBR 322 |
250 |
10 |
1 zu 10 |
130 |
6,3 x 104 |
|||
2-1 |
pBR 322 |
18 h auf Eis im Kühlschrank |
250 |
10 |
unverdünnt |
870 |
4,2 x 104 |
||
2-2 |
pBR 322 |
18 h auf Eis im Kühlschrank |
250 |
10 |
1 zu 10 |
87 |
4,2 x 104 |
||
3-1 |
pUC 18 |
50 |
10 |
unverdünnt |
1590 |
3.9 x 105 |
|||
3-2 |
pUC 18 |
50 |
10 |
1 zu 10 |
159 |
3.9 x 105 |
|||
3-3 |
pUC 18 |
50 |
10 |
1 zu 100 |
15 |
3.7 x 105 |
Ansatz |
Ausprägung |
Inkubation |
Inkubationszeit |
Verdünnung |
Kolonien ges. |
Kolonien/µg Plasmid |
1-1 |
30 |
37 °C |
21 |
unverdünnt |
65 |
6,6 x 103 |
1-2 |
30 |
37 °C |
21 |
1 zu 10 |
7 |
7,1 x 103 |
2-1 |
30 |
Raumtemp. |
68 |
unverdünnt |
41 |
4,2 x 103 |
2-2 |
30 |
Raumtemp. |
68 |
1 zu 10 |
8 |
8,1 x 103 |
3-1 |
0 |
37 °C |
21 |
unverdünnt |
46 |
4,7 x 103 |
3-2 |
0 |
37 °C |
21 |
1 zu 10 |
2 |
2,0 x 103 |
4-1 |
0 |
Raumtemp. |
68 |
unverdünnt |
45 |
4,6 x 103 |
4-2 |
0 |
Raumtemp. |
68 |
1 zu 10 |
2 |
2,0 x 103 |
In Tabelle 22 sind die Ergebnisse zur Frage der Notwendigkeit einer Ausprägungsphase
dargestellt, in der die transformierten Zellen das auf dem Plasmid codierte Enzym
ß-Lactamase für Ampicillinresistenz synthetisieren können, bevor sie auf Selektivmedien
ausplattiert werden. In der gleichen Tabelle befinden sich die Ergebnisse zur Frage, ob
eine Inkubation der transformierten Zellen nach Aus-plattierung bei 37 °C für
ausreichende Transformationseffizienzen erforderlich ist. Für die Herstellung kompetenter
Zellen dienten E. coli K12 DH5a Kolonien. Diese stammten
von einem LB-Agarnährboden, der nach dem Ausplattieren der
E. coli-Zellen bei Raumtemperatur gehalten wurde. Die darauf gewachsenen
Bakterienkolonien konnten nach ca. 96 Stunden für die Gewinnung kompetenter Zellen
verwendet werden. Der Zeitraum vom Ausplattieren der transformierten Zellen auf
Agarplatten bis zu dem Zeitpunkt, an welchen auf den Agarplatten eindeutig auszählbare
Bakterienkolonien zu sehen waren, wird als Inkubationszeit bezeichnet und in Stunden
angegeben.
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